Projekti / Programi
Vpliv počasnega zamrzovanja in vitrifikacije na izražanje miRNA v humanih semenčicah
| Koda |
Veda |
Področje |
Podpodročje |
| 3.05.00 |
Medicina |
Reprodukcija človeka |
|
| Koda |
Veda |
Področje |
| 3.02 |
Medicinske in zdravstvene vede |
Klinična medicina |
neplodnost, epigenetika, miRNA, seme, počasno zamrzovanje, vitrifikacija, rak, reproduktivna biomedicina
Raziskovalci (23)
Organizacije (1)
Povzetek
Zamrzovanje semena je izredno pomemben postopek pri ohranjanju moške plodnosti. Razlogov kdaj je plodnost moškega ogrožena je več, eden izmed pogostih pa je zaradi onkološke bolezni ali kakšne druge resne bolezni, ki zahteva zdravljenje s terapijo, ki pa bi lahko imela negativen vpliv na nastajanje semenčič (na spermatogenezo) ali pa vplivala negativno na njihovo kvaliteto, kljub na videz normalni spermatogenezi. Zato je pomembno, da se pred gonadotoksično terapijo ustrezno poskrbi za ohranjanje plodnosti pacienta. Zamrzovanje semena je učinkovita metoda tudi pri premostitvi drugih težav, ki se pokažejo tekom postopka zdravljenja neplodnosti ali pa so lahko tudi delni vzrok za neplodnost. Zamrzovanje semena se v klinični praksi sicer zelo uspešno uporablja že vrsto let, vendar pa je tudi znano, da sam postopek zamrzovanja in odmrzovanja lahko deloma negativno vpliva na kakovost semenčič. Običajno sicer ostane živih dovolj semenčic, ki imajo primerno kvaliteto za izvajanje postopa zunajtelesne oploditve. Poleg standardnih parametrov kakovosti semena se lahko določa še vrsto drugih parametrov ali pa izvede različne funkcionalne teste, ki pa v klinični praksi niso še povsod razširjeni oz. so nekateri šele v fazi raziskav. Takšni parametri so npr. fragmentacija DNA, ki jo je mogoče določiti z več metodami, določanje zrelosti kromatina z vidika prisotnosti histonov in protaminov, ki skrbijo za kondenzacijo DNA v kromatinu, funkcionalni test določanja deleža vezanih semenčic na hialuronan ali pa različni genetski/epigenetski testi. Prav napredek na področju genetskih/epigenetskih preiskav prinaša v zadnjem času dodatne možnosti pri določanju kakovosti semena, vendar pa se večina teh raziskav osredotoča bolj na določanje teh parametrov v svežem semenu. Genetske in epigenetske preiskave, ki se poglabljajo v vpliv zamrzovanja/odmrzovanja semena na izražanje izbranih označevalcev so redke, večina teh pa je opravljenih na živalskih modelih. Ker so epigenetske spremembe izjemnega pomena, saj se ravno tako lahko prenašajo na potomce in celo preko več generacij, je zelo pomembno ugotoviti ali postopek zamrzovanja/odmrzovanja semena vpliva tudi na te lastnosti. Na živalskem modelu je že bilo prikazano, da ta postopek lahko spremeni izražanje miRNA (samo eden izmed epigenetskih mehanizmov), pri človeku pa taka raziskava po našem znanju še ni bila opravljena. Sam postopek zamrzovanja semena, ki se trenutno uporablja v klinični praksi, se pogosto imenuje tudi počasni postopek zamrzovanja, saj se vzorec semena po dodatku krioprotektantov izpostavi počasnemu padcu temperature iz sobne temperature pa vso do -196°C, kar je tudi temperatura tekočega dušika. Zaenkrat ni še nobenega v klinično prakso splošno sprejetega postopka vitrifikacije humanega semena. Trenutno objavljene študije, ki primerjajo različne načine zamrzovanja semena se osredotočajo le na preverjanje osnovnih parametrov kakovosti semena, študij, ki pa bi preverile kako to vpliva na genetske/epigenetske lastnosti pa praktično ni. Zato bomo v naši študiju preverili ali se glede na način zamrzovanja/odmrzovanja humanega semena in rezultati funkcionalnih testov semenčic razlikujejo ter še pomembneje, ali se glede na način zamrzovanja/odmrzovanja (počasno zamrzovanje v primerjavi z vitrifikacijo) različno izražajo kandidatne miRNA. Najpogosteje se v začetnih fazah raziskav uporablja semene normalne kakovosti, vendar je ta način vprašljiv, saj imajo v klinični praksi pacienti, ki te postopke potrebujejo za zdravljenje, najpogosteje poslabšano kakovost semena. Zato bomo v naši študiji preverili tudi ali se pridobljeni rezultati funkcionalnih testov in epigenetskega testa (izražanje miRNA) glede postopka zamrzovanja/odmrzovnja razlikujejo tudi v odvisnosti od kakovosti semena. Primerjali bomo dve skupini, in sicer skupino z normalno kakovostjo semena in skupino s slabo kakovostjo semena v kateri bodo vzorci, ki bodo imeli diagnozo oligoastenoteratozoospermija.
