Projekti / Programi
Lanosterol 14alfa demetilaza v biosintezi holesterola in signalnih sterolov
| Koda |
Veda |
Področje |
Podpodročje |
| 1.05.00 |
Naravoslovje |
Biokemija in molekularna biologija |
|
| Koda |
Veda |
Področje |
| P004 |
Naravoslovno-matematične vede |
Biokemija, presnova |
| P320 |
Naravoslovno-matematične vede |
Nukleinske kisline, sinteza beljakovin |
| P340 |
Naravoslovno-matematične vede |
Lipidi, steroidi, membrane |
lanosterol 14alfa-demetilaza, citokrom P450, uravnavanje izražanja genov, analiza transkriptoma, tehnologija DNA čipov, funkcijska genomika, biosinteza holesterola, steroli MAS
Raziskovalci (12)
Organizacije (3)
Povzetek
Porušena homeostaza holesterola vodi v hiperlipidemije in predstavlja enega najpogostejših vzrokov smrti v razvitem svetu. V preteklem projektnem obdobju smo naredili velik napredek pri razumevanju mehanizmov sinteze holesterola in intermediatov MAS (mejozo aktivirajoči steroli), na ravni uravnavanja izražanja genov (trans-aktivacija lanosterol 14alfa-demetilaze CYP51 s cAMP stimulusi v pogojih sterolne represije), izražanja proteinov (CYP51 encimska aktivnosti v akrosomalnih membranah spermijev), in znotrajceličnega transporta (prehod iz ER preko Golgijevega aparata do akrosoma). V tem projektnem obdobju bomo izsledke o več-nivojskem uravnavanju gena CYP51 preslikali na druge gene homeostaze holesterola (skupina STEROLTALK) z uporabo pristopov funkcijske genomike (analize transkriptome, proteoma in metaboloma) in študijami interakcij med homeostazo holesterola ter drugimi endogenimi in eksogenimi procesi. Zaradi visoke evolucijske ohranjenosti sinteze in pretvorbe holesterola med sesalci bomo poleg človeških celičnih linij uporabljali tudi živalske modele, od miške (in vivo študije), do velikih sesalcev (bik in oven). Raziskali bomo regulatorne poti, ki so vključene v uravnavanje holesterogenih genov, s poudarkom na tkivni-specifičnosti in signalnih poteh, ki interagirajo s povratno zanko holesterola. Z ekspresijskim profiliranjem z DNA čipi, kvantitativnim PCR in študijami promotorja bomo identificirali fiziološka in patofoziološka stanja, kjer je izražanje holesterogenih genov neodvisno od povratne zanke holesterola. S HPLC bomo izmerili količino holesterola in MAS v živalskih tkivih in v celičnih kulturah, kjer bomo aktivirali različne signalne poti. Z metodami za študije proteoma bomo določiti sestavo CYP51 proteinskih kompleksov na Golgijevem aparatu ter na akrosomalni membrani. Določili bomo aktivnost encima CYP51 v različnih subcelularnih frakcijah, in s konfokalno mikroskopijo spremljali potovanje CYP51-GFP fuzijskega proteina. Raziskali bomo vzroke, ki preprečujejo homologno rekombinacijo cyp-loxP konstrukta v mišji genom in pripravili nove rekombinacijske konstrukte, ki bodo utrli pot do končnega cilja - pogojno ničelne miške s tehnologijo Cre-loxP.
