Cepivo temelji na receptor-vezalni domeni (RBD) glavnega virusnega antigena, proteina Spike. Domeno RBD smo povezali z različnimi variantami nanostrukturnih ogrodji (beta-annulus (bann) peptid, foldon, feritin in lumazin sintazo), ki omogočajo multimerizacijo epitopa, kar omogoča predstavitev epitope v podobni obliki kot na samem virusu in se odraža v višji imunogenosti v primerjavi z monomerno varianto epitopa. Kovalentna fuzija proteinske domene RBD s kratkim peptidom beta annulus je povzročila visoko imunogenost, razvoj nevtralizirajočih protiteles in robusten T celični odziv pri čemer je bil imunski odziv proti ogrodju nezaznaven. S poskusi, v katerih smo miši okuževali s pseudovirusom, smo pokazali, da takšna oblika cepiva uspešno ščiti poskusne živali pred infekcijo.
COBISS.SI-ID: 62539779
Širok potencial uporabe modificiranih celic zahteva dobro uravnavanje izražanja genov. Vgradnja predčasnega stop kodona v izbran gen, ki se lahko izraze le ob prisotnosti nekanonične aminokisline predstavlja dober način za regulacijo izražanja izbranega gena. V ta namen smo v celice vnesli tRNA sintetazo in tRNA, specifično za kodon TAG, kar je omogočalo prepis poročevalskega proteina ob dodatku nekanonične aminokisline (4-benzoyl-L-phenylalanine; Bpa) v medij. V zapis za protein smo dodali kodon TAG v različno številnih ponovitvah in na različna mesta v zaporedje. Pokazali smo, da je bilo za dobro delujoč regulatorni sistem optimalna postavitev TAG kodona takoj za začetni kodon, ki nosi zapis za aminokislino metionin in še na eno dodatno mesto v zaporedju. Način regulacije izražanja gena je prenosljiv na druge tarče in omogoča natančno uravnavanje izražanja.
COBISS.SI-ID: 19678723
Regulatorne celice T, ki izražajo FOXP3, predstavljajo pomembno populacijo limfocitov T z vlogo v vzdrževanju imunske homeostaze. Mutacije v genu FOXP3 lahko vodijo v razvoj avtoimunih obolenj. Z uporabo tehnologije CRISPRa smo spremijali fenotip T celične linije z uporabo načrtovanih transkripcijskih regulatorjev na osnovi proteina Cas9. Z uporabo specifičnih gRNA molekul smo ciljali znane in na novo določene regulatorne regije gen FOXP3. Pokazali smo, da sočasna indukcija izražanja genov FOXP3 in EOS vodi v povišano izražanje genov CD25 in TNFR2, torej smo uspeli v T celični liniji inducirati ekspresijski profil, ki dobro odraža fenotip celic Treg. Indukcija izražanja endogenega FOXP3 gena z metodo CRISPRa se je izkazala za zelo dobro orodje, saj je bilo izražanje FOXP3 podaljšano v primerjavi z vnosom plazmidne DNA z zapisom za FOXP3.
COBISS.SI-ID: 4332936