48. Krkine nagrade Markovič, Tijana. Vrednotenje imunske modulacije in učinkovitosti agonista receptorja EP4 in monoklonskih protiteles in vitro. Mentorica: prof. dr. Irena Mlinarič Raščan.Opis: Ovrednotenje imunomodulatornih učinkov spojin je pomemben del predkliničnega in toksikološkega vrednotenja zdravil. S tem namenom smo najprej vzpostavili nov testni sistem in vitro za vrednotenje imunotoksičnih in imunomodulatornih lastnosti spojin na osnovi limfoblasotidnih celičnih linij, nato pa smo ga uporabili za ovrednotenje imunomodulatornega delovanja agonista prostaglandinskega receptorja EP4, PgE1-OH. Nadalje smo raziskali pomen receptorja EP4 kot potencialne terapevtske tarče za zdravljenje B-celičnih levkemij in limfomov. PgE1-OH je zmanjšal aktivnost NF-?B v celični liniji Ramos Burkittovega limfoma, kar je vodilo v sinergistično delovanje z bortezomibom in doksorubicinom. PgE1-OH je sinergistično deloval tudi z biološkima zdraviloma rituksimabom in ofatumumabom, za katera smo predhodno potrdili, da inducirata s komplementom povzročeno citotoksičnost in vitro. Agonist EP4 je induciral apoptozo v primarnih limfocitih B (EC50 = 13,53 µM; N = 151), izoliranih iz polne krvi bolnikov z diagnozo kronične limfocitne levkemije (KLL), ki so privolili v sodelovanje v raziskavi. Posebnega pomena je odkritje, da je PgE1-OH deloval selektivno citotoksično in vitro tudi pri celicah KLL bolnikov z delecijo gena TP53, ki so odporni proti standardni terapiji. PgE1-OH je pri celicah KLL deloval sinergistično s fludarabinom, kar bi lahko odpiralo nove možnosti za zdravljenje. Receptor EP4 smo tako ovrednotili kot obetavno terapevtsko tarčo za zdravljenje B-celičnih levkemij in limfomov.
E.01 Domače nagrade
COBISS.SI-ID: 4629617Ozko terapevtsko okno tiopurinov, imunosupresivnih in citostatičnih zdravilnih učinkovin, narekuje potrebo po natančnem odmerjanju, a zapletena metabolizem in mehanizem delovanja te k posamezniku usmerjene terapije predstavljata kompleksen izziv. V sklopu raziskovalnega dela smo najprej identificirali selenocistein, substrat encima tiopurin S-metiltransferaza (TPMT), ki bi lahko bil pomemben pri njegovi endogeni vlogi. Nato smo se osredotočili na iskanje novih bioloških označevalcev odziva na tiopurine. Z vrednotenjem genskih lastnosti TPMT smo na zdravi slovenski populaciji ter na populaciji pacientov z akutno limfoblastno levkemijo ali vnetno črevesno boleznijo ugotovili, da so specifična tandemska zaporedja v genu za TPMT povezana s klinično že uveljavljenimi genskimi polimorfizmi. Njihova prisotnost pri pacientih je povezana z življenje ogrožajočimi neželenimi učinki tiopurinov. Pri odkrivanju od TPMT neodvisnih dejavnikov odziva na tiopurine smo na modelu limfoblastoidnih celičnih linij različnih posameznikov pokazali, da zvišana raven izražanja gena za prenašalni P-glikoprotein napoveduje rezistenco celic proti tiopurinom. V nadaljevanju smo s sodobnimi metodami in silico raziskovali mehanizme interakcij znanih substratov in inhibitorjev TPMT. Na podlagi teh izsledkov smo na celičnih modelih potrdili inhibicijo TPMT mešanega mehanizma s sulfasalazinom in dokazali, da sulfasalazin poveča citotoksičnost tiopurinov. Rezultati raziskovalnega dela so povečali nabor potencialnih označevalcev dovzetnosti za tiopurine ter prikazali relevantnost interakcij med zdravilnimi učinkovinami, kar bo pripomoglo k izboljšanju napovedi in izida zdravljenja s temi zdravilnimi učinkovinami.
E.01 Domače nagrade
COBISS.SI-ID: 4845681Mentorica: prof. dr. Irena Mlinarič-Raščan; Markovič, Tijana. Vrednotenje imunske modulacije in učinkovitosti agonista receptorja EP4 in monoklonskih protiteles in vitro Opis: Ovrednotenje imunomodulatornih učinkov spojin je pomemben del predkliničnega in toksikološkega vrednotenja zdravil. S tem namenom smo najprej vzpostavili nov in vitro testni sistem za vrednotenje imunotoksičnih in imunomodulatornih lastnosti spojin na osnovi limfoblasotidnih celičnih linij, ki smo ga nato uporabili za ovrednotenje imunomodulatornega delovanja agonista prostaglandinskega receptorja EP4, PgE1-OH. Nadalje smo raziskali pomen receptorja EP4 kot potencialne terapevtske tarče za zdravljenje B celičnih levkemij in limfomov. PgE1-OH je znižal aktivnost NF-?B v celični liniji Burkittovega limfoma Ramos, kar je vodilo v sinergistično delovanje s bortezomibom in doksorubicinom. PgE1-OH je deloval sinergistično tudi z biološkima zdraviloma rituksimabom in ofatumumabom, za katera smo predhodno potrdili, da inducirata s komplementom povzročeno citotoksičnost in vitro. EP4 agonist je induciral apoptozo v primarnih limfocitih B, izoliranih iz polne krvi bolnikov z diagnozo kronične limfocitne levkemije (KLL), ki so privolili za sodelovanje v raziskavi. Posebnega pomena je odkritje, da je PgE1-OH deloval selektivno citotoksično in vitro tudi pri celicah KLL bolnikov, ki so rezistentni na standardno terapijo in nosijo delecijo TP53 gena. PgE1-OH je pri celicah KLL deloval sinergistično s fludarabinom, kar bi lahko odpiralo nove možnosti za zdravljenje. Receptor EP4 smo tako ovrednotili kot obetavno terapevtsko tarčo za zdravljenje B celičnih levkemij in limfomov.
D.10 Pedagoško delo
COBISS.SI-ID: 295575552he present invention belongs to the field of pharmaceutical industry and relates to novel inhibitors of chymotrypsin- like activity of the immunoproteasome (inhibitors of %5i or LMP7 subunit) with a psoralen-based structure in the form of pure diastereoisomers, mixture of diastereomers, in the form of pure enantiomers, mixture of enantiomers, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates or solvates thereof. Such compounds are particularly useful for the treatment of diseases that are related with increased activity of the immunoproteasome. The present invention also relates to the preparation of these compounds, use of these compounds, and to the pharmaceutical products that contain these compounds. The characteristic of these compounds is that they bind into the active site of the 5i subunit through specific noncovalent (polar and hydrophobic interactions) or concurrent noncovalent (polar and hydrophobic interactions) and covalent interactions.
F.33 Patent v Sloveniji
COBISS.SI-ID: 4206705Kronična limfocitna levkemija (KLL) je najpogostejša levkemija pri odraslih v zahodnem svetu. Bolezen lahko poteka agresivno ali indolentno. Standardno zdravljenje temelji na kemoimunoterapiji, pogosta je shema FCR, ki zajema fludarabin, ciklofosfamid in rituksimab. Nove možnosti zdravljenja vključujejo tarčno zdravljenje z ibrutinibom in idelalisibom, ki zavirata signalizacijo preko B-celičnega receptorja (BCR). Prostaglandinski receptor EP4 predstavlja novo potencialno tarčo za zdravljenje B celičnih levkemij in limfomov. V magistrski nalogi smo ovrednotili selektivna agonista receptorja EP4 L-902,688 in PgE1-OH. Z uporabo testa metabolne aktivnosti in pretočne citometrije smo dokazali, da je citotoksično delovanje na celicah KLL časovno in koncentracijsko odvisno. Z uporabo selektivnega antagonista CJ-042794 smo potrdili, da so učinki agonistov na celicah KLL posredovani preko receptorja EP4. Vrednosti EC50 L-902,688 in PgE1-OH so bile statistično značilno manjše na celicah KLL v primerjavi z limfoblastoidnimi celičnimi linijami (LCL) in perifernimi mononuklearnimi krvnimi celicami (PBMC), s čimer smo potrdili selektivnost delovanja na maligne limfocite B. V nadaljevanju smo ovrednotili delovanje najpogosteje uporabljanega zdravila pri KLL fludarabina in novih tarčnih zdravil ibrutiniba in idelalisiba. Po 24 urah je imel fludarabin statistično značilno večje vrednosti EC50 v primerjavi z L-902,688 in PgE1-OH, idelalisib pa le v primerjavi z L-902,688. Po 48 urah so bile vrednosti EC50 (IC50) fludarabina, ibrutiniba in idelalisiba 4,65 µM, 3,15 µM in 8,84 µM primerljive z vrednostmi EC50 za L-902,688 in PgE1-OH. Ker je uspešnost zdravljenja KLL večja pri kombinacijah učinkovin z različnimi mehanizmi delovanja, smo ovrednotili potencialni sinergizem L-902,688 in PgE1-OH s fludarabinom, ibrutinibom ter idelalisibom. Pri kombinaciji agonistov receptorja EP4 s fludarabinom in ibrutinibom smo zaznali sinergizem pri manjših koncentracijah spojin, medtem ko je bil z idelalisibom, ki ima med testiranimi spojinami najmanj citotoksično delovanje (IC50 po 24 urah je bila 20,64 µM, po 48 urah pa 8,84 µM), sinergizem prisoten pri vseh koncentracijah spojin. Z aneksinom V smo dokazali, da L-902,688 in PgE1-OH inducirata apoptozo v malignih limfocitih B, s testom CFSE pa smo pokazali, da delujeta tudi citostatično. Po 48 urah sta obe spojini ustavili delitev celic, kar pomeni, da bi lahko zavirali razmnoževanje celic KLL tudi in vivo. Pokazali smo tudi, da spojini ne vplivata na ekspresijo receptorja EP4, kar potrjuje pomen receptorja EP4 kot potencialne terapevtske tarče. Selektivni agonisti receptorja EP4 imajo citotoksično in citostatično delovanje ter izkazujejo sinergistične učinke z novejšimi terapevtiki in vitro, kar bi lahko vodilo v nove možnosti zdravljenja KLL.
E.01 Domače nagrade
COBISS.SI-ID: 4647793