Uvod: Zvišana koncentracija bazalne serumske triptaze je povezana s hudo sistemsko anafilaksijo, predvsem po pikih kožekrilcev (Hymenoptera). Pri nekaterih bolnikih je vzrok za to mastocitoza klonalnega izvora, vendar le-ta klinične povezave ne pojasni v celoti. Naš cilj je bil ugotoviti razširjenost in s tem vpliv genotipov triptaze na anafilaksijo pri ljudeh. Metode: Pri velikem številu bolnikov s sistemsko mastocitozo (SM) in anafilaksijo po pikih kožekrilcev ter idiopatsko anafilaksijo iz referenčnih centrov v Italiji, Sloveniji in ZDA smo opravili genotipizacijo triptaze z metodo ddPCR ter preverili povezavo med težo reakcije po Muellerju in genotipom triptaze. S pomočjo ddPCR in in silico analize sekvence celotnega genoma smo določili genotipe triptaze tudi pri zdravih kontrolah in kontrolah brez alergijskih bolezni. Učinke združenih in rekombinantnih humanih triptaz, agonista in antagonista receptorja 2 in mAb, ki nevtralizira triptazo, na prepustnost endotelijskih celic HUVEC smo testirali s pomočjo sistema Transwell. Rezultati: Dedna ? -triptasemija (HaT) - genetska lastnost, ki jo povzroča povečano število kopij triptaze- ? / ß1 (TPSAB1), ki kodira alfa-triptazo in povzroča povišano raven bazalne serumske triptaze - je bila prisotna pri 5,6% (7 od 125) zdravih posameznikih in 5,3% (21 od 398) kontrol brez alergijskih bolezni. HaT je bil povezan z najhujšo anafilaksijo po pikih kožekrilcev Muellerjeve stopnje IV (relativno tveganje = 2,0; P ( 0,05) in bolj razširjen tako pri idiopatski anafilaksiji (n = 8 od 47; [17%; P = .006]) kot pri SM (n = 10 od 82 [12,2%; P = 0,03]). Med bolniki s SM je bil sočasni HaT povezan s povečanim tveganjem za sistemsko anafilaksijo (relativno tveganje = 9,5; P = 0,007). In vitro so žilno permeabilnost, povzročili samo združeni zreli triptazi, ne pa tudi alfaali beta-triptazni homotetrameri. Zaključek: Tveganje za hudo anafilaksijo pri ljudeh je povezano s povečanim številom kopij gena TPSAB1, ki nosi zapis za ?-tryptazo.
COBISS.SI-ID: 27755011
V raziskavi smo pokazali, da je delež prisotnosti različice p.D816V v genu KIT v periferni krvi med bolniki z anafilaksijo po piku kožekrilca in normalnimi vrednostmi ((11.4ng/mL) serumske bazalne triptaze visok; le-ta znaša 8% (28/351). Večinoma so se bolniki z različico p.D186V nahajali v skupini z najtežjo obliko anafilaksije (Mueller IV) ; tu je delež znašal 18.2 % (24/132) in je bil statistično značilno višji kot v skupinah z blažjo obliko, kjer je znašal 1.8 % (4/88 v skupini Mueller III in 0/131 v ostalih skupinah (Mueller I/II); P(0.001). Znotraj skupine z najtežjo obliko anafilaksije (Mueller IV), so imeli bolniki s KIT p.D816V različico statistično značilno težji klinični potek anafilaksije in sicer je imel višji delež bolnikov (58.3 % [14/24] proti 34.3% [37/108]; P=0.03) izgubo zavesti in odsotnost kožnih simptomov (41.7 % [10/24] proti 15.7 % [17/108]; P=0.004). Prisotnost KIT p.D816V različice je bila, med posamezniki z normalnimi vrednostmi serumske triptaze, glavni neodvisni napovedni dejavnik težke anafilaksije (OR [95% CI]: 10.25 [3.75-36.14]; p(0.0001). Nadalje smo pokazali, da dedna [alfa]-triptazemija (povečano število kopij gena TPSAB1) predstavlja najpogostejši vzrok povišane bazalne triptaze (65.2%, 15/23) med bolniki z anafilaksijo po piku kožekrilca; s prisotnostjo dedne [alfa]-triptazemije in KIT p.D816V različice smo uspeli pojasniti 90 % (20/23) povišanih vrednosti bazalne triptaze.
COBISS.SI-ID: 56665603
Uvod: Vloga kemokinov pri anafilaksiji ni polno pojasnjena. Metode: V raziskavo smo prospektivno vključili 49 bolnikov, ki so bili obravnavani na urgentnem oddelku zaradi akutne anafilaktične reakcije in 28 zdravih oseb. Merili smo serumske vrednosti kemokinov CCL2, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL13, CCL17, CCL21, CCL22, CCL24, in CCL26, triptazo, absolutno število cirkulirajočih bazofilcev, monocitov, limfocitov in perifernih mononuklearnih celic v periferni krvi ter gensko izražanje FCER1A, CPA3 in HDC v krvi v dveh časovnih točkah: vzorci odvzeti med anafilaksijo ter parni vzorci odvzeti približno tri mesece kasneje. V nadaljevanju smo proučevali in vitro kemotaktično aktivnost kemokinov med anafilaksijo za in vitro migracijo celic. Rezultati: Samo koncentracija kemokina CCL2 je bila statististično značilno povišana pri vzorcih z anafilakcijo (mediana 514 pg/ml) v primerjavi s parnimi vzorci 284 pg/ml, P ( 0.0001) ter zdravimi kontrolami (279 pg/ml, P ( 0.0001); pri drugih proučevanih kemokinih nismo zaznali razlik. Ugotovili smo pozitivno povezavo med stopnjo povečanja serumskega CCL2 (mediana [razpon]: 106.0% [- 44.7% to 557.4%]) in triptazo (133.8% [- 6.6% to 893.4%]; r = 0.68, P ( 0.0001) ter med akutno koncentracijo serumskega CCL2 in akutno koncentracijo serumske triptaze (r=0.77, P(0.0001). Število bazofilcev, ne pa tudi drugih celic, je bilo značilno znižano med anafilaksijo (mediana 5.0 vs. 19.1 celic/µl v parnih vzorcih; P(0.0001); znižanje v genskem ozražanju bazofilnih markerev (P?0.0018) je potrdilo ta razultat. Anafilaktični serum spodbuja in vitro migracijo bazofilcev skozi od CCL2-odvisno kemotaktično aktivnost; v nasprotju pri parnih vzorcih nismo dokazali omenjene kemotaktične aktivnosti. Zaključek: Naši rezultati kažejo na pomembno in specifično vlogo CCL2-posredovane kemotaktične aktivnosti na patofiziologijo humane anafilaksije.
COBISS.SI-ID: 43048963
Astma je huda in kronična pljučna bolezen, ki prizadene več kot 300 milijonov ljudi po vsem svetu. Medtem ko je bilo v preteklosti na voljo nekaj zdravil za zdravljenje astme, se trenutno pojavljajo nove možnosti zdravljenja, ki se zdijo zelo učinkovite pri nekaterih podskupinah bolnikov. V skladu s tem je potrebno določiti biomarkerje, ki omogočajo izbiro bolnikov za izpopolnjene in prilagojene strategije zdravljenja. V zadnjem času so bili razviti serološki testi čipov, ki temeljijo na mikro-urejenih molekulah alergena in peptidih, pridobljenih iz najpogostejših sevov rinovirusov, ki lahko diskriminirajo dve najpogostejši obliki astme, to je astmo, ki jo povzročajo alergeni in astmo, ki jo povzročajo virusi. Trdimo lahko, da lahko razvrstitev bolnikov z astmo glede na te pogoste sprožilne dejavnike odpre nove možnosti za osebno upravljanje astme.
COBISS.SI-ID: 2048639089
UVOD: Limfociti T so celice, ki imajo pomembno vlogo pri zakasnelih preobčutljivostnih reakcijah. Njihovo reaktivnost je mogoče oceniti z merjenjem aktivacijskega markerja CD69, katerega aktivaciji sledi proliferacija in proizvodnja določenih citokinov. Namen raziskave je bil razviti novo kvantitativno analizo povišanega izražanja CD69 z vpeljavo indeksa aktivacije (IA) absolutnega števila CD69 na površini različnih podskupin T celic, pri bolnikih preobčutljivih na nikelj in primerjava z ostalimi predhodno uporabljenimi pristopi. METODE: V raziskavo smo vključili 10 bolnikov z zabeleženimi alergijami na nikelj in 9 zdravih kontrol za primerjavo. S pomočjo pretočne citometrije smo iz heparinizirane krvi, ki smo jo predhodno stimulirali in inkubirali 48 ur z nikljevim sulfatom, določili izražanje CD69 na površini CD3+, CD3+CD4+ in CD3+CD8+ limfocitov T. Po stimulaciji in inkubaciji smo določili absolutno število CD69 na površini celic s pomočjo mikrobeadov in izračunali indeks aktivacije. Določili smo tudi izločanje citokinov IL-2, IL-5, IL-13 in IFN-? in sicer po stimulaciji in 48 urni inkubaciji mononuklearnih celic periferne krvi z nikljevim sulfatom. REZULTATI: Rezultati so pokazali, da je najbolj senzitivna metoda določitev absolutnega indeksa aktivacije (IA), ki je bil izračunan kot razmerje med absolutnim številom CD69-pozitivnih T celic stimuliranih z nikljem in absolutnim številom CD69-pozitivnih T celic nestimulirane krvi. Ta nov kvantitatvni pristop se je izkazal za bolj diskriminatornega od ostalih predhodno uporabljenih pristopov, ki temeljijo na določanju odstotka indeksa aktivacije CD69 T celic in merjenju citokinov. ZAKLJUČEK: Določanje indeksa aktivacije absolutnega števila CD69-pozitivnih celic se je izkazal za natančen nov pristop kvantifikacije antigen specifičnih celic T v krvi bolnikov preobčutljivih na nikelj. Ta nov pristop omogoča boljšo in vitro oceno bolnikov z zakasnelimi preobčutljivostnimi reakcijami.
COBISS.SI-ID: 2048400753