Nevrotoksična sekretorna fosfolipaze A2, amoditoksin, se z visoko afiniteto veže na kalmodulin (CaM), kar vodi v njegovo stabilizacijo v redukcijskih pogojih in dvig encimske aktivnosti tako v redukcijskih kot tudi v neredukcijskih pogojih. Zgradili smo energetsko najbolj ugoden model kompleksa, s katerim smo na strukturni ravni razložili omenjene opažene učinke. Na osnovi modela smo predlagali, da strukturno podobne sesalske sPLA2 skupin V in X, ne pa IB in IIA, tvorijo stabilni kompleks, kar naj bi tudi vodilo v povišanje njihove encimske aktivnosti. To smo tudi eksperimentalno potrdili.
COBISS.SI-ID: 23512103
V članku smo opisali razvoj našega učinkovitega ekspresijskega sistema bakterije Escherichia coli, kot tudi in vitro renaturacijo in enostaven postopek čiščenja, ki omogoča donos do 10 mg človeške sPLA2-X na liter kulture. Za razliko od naravnega proteina je bil rekombinantni encim pridobljen v bakterijskih celicah brez N-terminalnega propeptida, tj. kot zrel protein, in ni bil N-glikoziliran, je pa zadržal vse encimske lastnosti pri hidrolizi vezikularnih substratov s fosfatidilglicerolom ali fosfatidilholinom.
COBISS.SI-ID: 24268839
Pri sesalcih je bilo doslej prepoznanih 29 fosfolipaz A2, ki delujejo znotraj- in/ali zunajcelično. Večino slednjih predstavljajo sekretorne fosfolipaze A2, ki so kot encimi ali ligandi za različne receptorje vpletene v številne fiziološke in patološke procese. To je spodbudilo farmacevtska podjetja k intenzivnemu razvoju specifičnih inhibitorjev za lajšanje, preprečevanje in zdravljenje obolenj, povezanih s sekretornimi fosfolipazami A2, kot so npr. vnetja, ateroskleroza, nevrodegenerativna in rakava obolenja.
COBISS.SI-ID: 21552167
Kalmodulin stabilizira konformacijo nevrotoksične sekretorne fosfolipaze A2 skupine IIA, amoditoksina, in hkrati poviša njeno encimsko aktivnost. Dobljeni rezultati ne dajejo le vpogleda v nevrotoksično delovanje amoditoksinov, temveč tudi v mehanizme, ki so vključeni v regulacijo delovanja strukturno podobnih sesalskih sPLA2, kot npr. skupin V in X, v citosolu.
COBISS.SI-ID: 23138087