J1-4305 — Zaključno poročilo
1.
Tvorba pore na meji interfazi med proteini in lipidi

V preglednem članku v eni od najbolj prestižnih biokemijskih revij smo objavili pregled delovanja nekaterih MACPF/CDC proteinov, s poudarkom na tvorbi por s t.i. loki. V zadnjem času se je izkazalo, da transmembranske pore lahko nastanejo tudi z nepopolnimi agregati proteinov MACPF/CDC, pa tudi drugih.

COBISS.SI-ID: 5633562
2.
Efekti proteinov MACPF/CDC na lipidne membrane

V preglednem članku smo opisali, kako protieni MACPF/CDC vplivajo na lipidne membrane. Povzeli smo njihove lastnosti zgradbe in delovanja, s poudarkom na tvorbi transmembranskih por.

COBISS.SI-ID: 5056026
3.
Membranski holesterol, sfingomielin in ostreolizin A so nujno potrebni za tvorbo por povzročenih s plevrotolizinom B

Iz gobe Pleurotus ostreatus smo izolirali nativna bikomponentna proteinska tvorca por ostreolizin A (OlyA) in pleurotolizin B (PlyB) ter pripravili njune rekombinantne različice, da smo preučili njuno vezavo na lipide in mehanizem tvorbe transmembranskih por v naravnih in umetnih lipidnih membranah. Pokazali smo, da se OlyA selektivno veže na membrane s povečano vsebnostjo holesterola in sfingomielina, vendar jih sam ne permeabilizira. DeltaPlyB, z delecijo na Nkoncu in z domeno kompleksa komplementa/perforina (MACPF), je spontano oligomeriziral v raztopini in se le šibko in nespecifično vezal na lipide in sam ni permeabiliziral membran. Opredelili smo strukturne lastnosti por. Na osnovi strukturnih in funkcionalnih lastnosti so te pore zelo podobne tistim, ki jih tvorijo MACPF proteini in od holesterolaodvisni bakterijski citolizini.

COBISS.SI-ID: 26868007
4.
Subcelična lokalizacija sfingomielina na osnovi uporabe dveh sond, ki temeljita na toksinih, ki tvorijo pore

Sfingomielin je pogost lipid celičnih membran. Znotrajcelična razporeditev sfingomielina ostaja nepojasnjena. Tukaj smo za označevanje sfingomielina uporabili dve različni sond, temelječi na proteinih: ekvinatoksin iz morske vetrnice in lizenin iz deževnika. Pokazali smo, da ima plazemska membrana sfingomielin v različnih domenah: takšne, ki se obarvajo samo z lizeninom, z ekvinatoksinom ali takšne, ki jih obarvata obe sondi. Uporaba dveh različnih sond bo omogočila dodaten vpogled v različne procese v celicah, kjer je vključen sfingomielin.

COBISS.SI-ID: 5025562
5.
pH odvisnost agregacije in tovrbe por listeriolizina O

Listeriolizin O je pomemben virulenčni dejavnik, vpletena v pobeg bakterije Listeria monocytogenes iz fagolizosoma. pH odvisno delovanje še ni popolnoma razsjasnjeno in tukaj smo raziskali funkcijske in strukturne lastnosti listeriolizina O. Pokazali smo hitro agregira pri temperaturah nad 30 stopinj in pri nevtralnem pH. Agregati imajo biofizikalne lastnosti amiloida. Predlagamo, da LLO spontano agregira pri nevtralnem pH in da je to lahko glavni mehanizem njegove inaktivacije.

COBISS.SI-ID: 4881690