V tem delu smo pripravili zajčje antiserume, ki so vsebovali funkcionalna protitelesa (Ab) specifična za vsako od dveh skupin komponent modrasovega (Vaa) strupa, ki izzoveta patološki učinek, hemoragične metaloproteinaze (H) in nevrotoksične amoditoksine (Atxs) in za obe skupini molekul skupaj. Vpletenost teh Ab v nevtralizacijo toksičnosti celokupnega modrasovega strupa v miški smo izmerii z ED50 testom. ED50 test na miškah je edini uradno odobreni test za določevanje učinkovitosti antiserumov. Pokazali smo, da so polno funkcionalna anti-Atx Ab odgovorna za nevtralizacijo toksičnosti celotnega strupa, medtem ko anti-H Ab ne zaščitijo mišk. Z ED50 testom v miškah torej ne moremo določiti Ab specifičnih za modrasove hemoragine in zato ni primeren za določanje kvalitete antiserumov za potrebe humane medicine.
COBISS.SI-ID: 25699367
V tem delu smo opisali novo komponento modrasovega strupa VaH3, kot močno hemoragično kačjo metaloproteinazo (SVMP). Njena proteolitična aktivnost in stabilnost sta odvisni od Zn2+ in Ca2+ ionov. Z MALDI/TOF MS analizo smo določili maso tega rahlo kislega proteina na 104 kDa. Molekula je dimerna in jo sestavljata dve identični podenoti mase 53.7 kDa. N-deglikozilacija je razkrila, da je na vsaki podenoti vezanih za 4.6 kDa sladkorjev. S proteinskim sekveniranjem in sekveniranjem cDNA zapisa za molekulo smo določili primarno strukturo celotnega proteina. Vsaka podenota je sestavljena iz metaloproteinazne, dizintegrinske in s Cys-bogate domene, zato sodi v skupino P-IIIc SVMP. Sekvenčno je VaH3 zelo podobna reprolizinom, ki inducirajo apoptozo vaskularnih endotelijskih celic. Anti-amoditaginska protitelesa močno navzkrižno reagirajo z VaH3 in popolnoma nevtralizirajo njegovo hemoragičnost v podgani, kljub dejstvu, da ti dve hemoragični P-III SVMP iz strupa modrasa strukturno nista zelo homologni. Kljub ozki proteolitski specifičnosti, je VaH3 hitro razgradil nekatere proteine, komponente bazalne membrane, kot tudi nekatere proteine iz krvne plazme, ki so udeleženi pri koagulaciji krvi. Omenjene proteolitske lastnosti zelo verjetno prispevajo k hemoragičnosti VaH3. Zgradili smo tridimenzionalni model VaH3, da bi si z njim pomagali razložiti strukturno-funkcijske povezave pri ADAM/ADAMTS družini proteinov. Ta družina proteinov, z visokim terapevtskim potencialom pri človeku, je strukturno namreč precej podobna VaH3.