V naši raziskavi smo se ukvarjali z izražanjem genov pluripotentnosti med diferenciacijo in dediferenciacijo celic. Transkripcijski dejavnik OCT4A je eden od glavnih urejevalcev pluripotentnosti, ki se izraža v embrionalnih matičnih celicah, embrionalnih karcinomskih celicah in primordialnih germinalnih celicah. V zadnjih letih so izražanje OCT4A zaznali tudi v različnih tumorjih, normalnem tkivu odraslega in v določenih celičnih linijah. Gen OCT4 ima tri alternativne transkripte: OCT4A, OCT4B in OCT4B1, ki se lahko prevedejo v štiri različne proteinske izoforme: OCT4A, OCT4B-265, OCT4B-190 in OCT4B-164. Poleg tega je v genomu vsaj še šest znanih psevdogenov (OCT4-pg1, OCT4-pg2, OCT4-pg3, OCT4-pg4, OCT4-pg5 in OCT4-pg6). V celicah z jedrom, izoliranih iz humane popkovnične krvi, kostnega mozga, periferne krvi in humanih fibroblastov, nismo zaznali izražanja embrionalne oblike OCT4A, temveč samo izražanje psevdogenov OCT4-pg1, OCT4-pg3 in OCT4-pg4. Nasprotno nediferencirane humane embrionalne matične celice, linija H9, izražajo samo embrionalni OCT4A in ne izražajo nobenega psevdogena. Med diferenciacijo embrionalnih matičnih celic, so se vsi trije preučevani psevdogeni začeli izražati. Diferencirane embrionalne matične celice, ki niso več izražale označevalcev pluripotentnosti OCT4 in CRIPTO-1, so izražale samo še psevdogene OCT4. Zanimivo je, da do podobnih sprememb kot med diferenciacijo hEMC, pride tudi ob dediferenciaciji somatskih celic. Po kratkotrajnem gojenju (3 dni) pri nižjem odstotku kisika ter v mediju z dodatkom rastnega dejavnika FGF2, humani fibroblasti nehajo izražati psevdogene OCT4 ter začnejo izražati OCT4A, vendar na nižji ravni kot hEMC. Naša študija je prva, v kateri je bil odkrit preklop med izražanjem embrionalnega OCT4A in njegovih psevdogenov kot posledica manipulacije pogojev gojenja ter spreminjanja diferenciacijskega statusa celic. Ta odkritja dajejo tudi nov pogled na funkcijo psevdogenov, saj kažejo, da je njihovo izražanje odvisno od diferenciranosti celic. Izražanje psevdogenov OCT4 smo zaznali samo v diferenciranih celicah, zato je mogoče, da se bodo izkazali za nove uporabne označevalce diferenciranosti. V prihodnosti bi radi ugotovili še ali se psevdogeni OCT4 tudi prevajajo v proteine in če se, kakšnaj en jihova funkcija. Na osnovi naših rezultatov lahko tudi drugače interpretiramo pretekle podatke o izražanju embrionalnega OCT4A v najrazličnejših somatskih, celičnih tipih kot tudi v embrionalnim podobnih matičnih celicah odraslega. V raziskavi smo preverjali tudi specifičnost objavljenih oligonukleotidnih začetnikov za metodo PCR, ter po pričakovanjih ugotovili, da jih večina, poleg embrionalne oblike, pomnožuje tudi po več psevdogenov ter izoformo B.
D.09 Mentorstvo doktorandom
COBISS.SI-ID: 266048512S terminom napredno zdravljenje opisujemo celično terapijo, tkivno inženirstvo in gensko terapijo. Celična terapija je zdravljenje z avtolognimi ali alogenskimi celicami. S presajenimi celicami lahko nadomestimo manjkajoče ali obolele celice oziroma njihove sestavine, ali pa z njimi dosežemo druge terapevtske učinke (npr. spremembe imunskega sistema, napad na rakave celice). Najbolj razširjena oblika je presaditev krvotvornih matičnih celic, s katero zdravimo številne, večinoma hematološke bolezni. Kot vir krvotvornih matičnih celic je periferna kri v veliki meri nadomestila kostni mozeg. Ustanovitev registrov prostovoljnih darovalcev je močno povečala dosegljivost darovalcev. Primeren vir alogenskih krvotvornih matičnih celic je tudi popkovnična kri, ki je široko dostopna, donorju ne prinaša tveganj in povzroča manj bolezni presadka proti gostitelju. Terapije s specifičnimi populacijami levkocitov omogočajo tako selektivne protitumorske učinke kot tudi zaviranje bolezni presadka proti gostitelju ter avtoimunosti. Terapija s presaditvijo matičnih celic se bo v prihodnosti najverjetneje uporabljala tudi za zdravljenje bolezni kot so Parkinsonova bolezen, sladkorna bolezen, artritis, multipla skleroza in kardiovaskularne bolezni. Podobno kot pri celičnih terapijah, tudi pri tkivnem inženirstvu predstavljajo glavno terapevtsko 'učinkovino' celice. Članek opisuje oblike naprednega zdravljenja, ki se klinično že uporabljajo.
F.18 Posredovanje novih znanj neposrednim uporabnikom (seminarji, forumi, konference)
COBISS.SI-ID: 30934489Popkovnična kri (PK) je bogat vir matičnih celic. Vsebuje tako krvotvorne kot mezenhimske matične celice, ki postajajo zanimive za uporabo v regenerativni medicini. Javne banke popkovnične krvi shranjujejo že več kot 570.000 enot PK, ki so povezani povezane v mednarodne registre PK. Po ocenah je še večje število shranjenih avtolognih enot PK v zasebnih bankah.Večina strokovnih združenj ne podpira shranjevanja v avtolognih bankah z vidika obstoječih indikacij za presajanje KMC. Avtologna PK ima potencialni pomen na področju razvijajoče se regenerativne medicine. V Sloveniji deluje javna banka popkovnične krvi v okviru Zavoda RS za transfuzijsko medicino, v kateri je bilo konec leta 2012 shranjenih 859 enot. Od odvzetih enot PK se v javno banko shranijo le tiste, ki izpolnjujejo stroge zahteve kakovosti.
F.22 Izboljšanje obstoječih zdravstvenih/diagnostičnih metod/postopkov
COBISS.SI-ID: 30611417