Amnijska membrana (AM) ima biološke in mehanske lastnosti primerne za uporabo v tkivnem inženirstvu. Namen naše raziskave je bil ugotoviti, ali različni nosilci iz AM omogočajo rast in diferenciacijo normalnih urotelijskih celic. Uporabili smo zamrznjeno humano AM in z različnimi metodološkimi pristopi preverili proliferacijo in diferenciacijo urotelijskih celic. Z uporabo presevne elektronske mikroskopije, z uporabo različnih histokemijskih in imunofluorescenčnih metod smo dokazali najhitrejšo rast in najvišja diferenciacijo urotelijskih celic na tistih nosilcih iz AM, kjer so bile urotelijske celice v stiku z vezivnim tkivom AM. Dokazali smo, da je vzpostavljen model primeren tako za bazične kot tudi aplikativne študije spodnjega dela sečil, predvsem za predklinično testiranje različnih učinkovin, med drugim tudi potencialnih novih zdravil.
COBISS.SI-ID: 31114969
Kontaminacija celičnih kultur je eden največjih problemov številnih celičnih laboratorijev. Okužbe celičnih kultur so lahko sekundarne (so se zgodile v času gojenja celic v laboratoriju) ali primarne, ko izvirajo iz donorskega tkiva. Slednje zahtevajo posebno pozornost. V naši raziskavi smo opisali odkritje novega seva prašičjega adenovirusa (PAdV), t.j. sev PAdV-SVN1 v kulturah normalnih prašičjih urotelijskih (NPU) celicah, izoliranih iz sečnih mehurjev domačih prašičev. Celične kulture NPU smo analizirali s svetlobno in presevno elektronsko mikroskopijo ter z verižno reakcijo s polimerazo (PCR). Na osnovi ultrastrukture virionov smo diagnosticirali okužbo z adenovirusom. Nadaljnje podrobne analize sekvence virusne DNA z reakcijo PCR so pokazale največjo podobnost z nedavno opisanim sevom PAdV-WI. Poleg tega so nadaljnje analize ultrastrukture potrdile za adenoviruse značilen življenjski cikel. Na osnovi rezultatov naše raziskave in v izogib kontaminacije in vitro modelov menimo, da je predhodna mikrobiološko analiza donorskega tkiva, iz katerega se pripravlja celične kulture, zelo priporočljiva.
COBISS.SI-ID: 31479257
Rak sečnega mehurja je deveti najpogostejši rak na svetu z visoko stopnjo ponovljivosti. Intravezikalna terapija bi lahko zaradi enostavnega dostopa skozi kateter v sečni mehur v prihodnje predstavljala veliko bolj učinkovito dodatno zdravljenje. V ta namen je potrebno razviti dobre sisteme ciljanega vnosa citostatikov v rakave celice. Lektini so proteini, ki se selektivno vežejo na določene sladkorne preostanke glikoproteinov. Znano je, da se med rakavo transformacijo spremenijo sladkorni preostanki na površini celic. Ugotovili smo, da kažejo določeni lektini (jakalin in lektin iz rastline Datura stramonium) visoko selektivnost za rakave celice. Iz naših rezultatov smo zaključili, da so lektini potencialno uporabni za izboljšanje dodatnega zdravljenja raka sečnega mehurja.
COBISS.SI-ID: 30779353
Uropatogene E. coli (UPEC) lahko med akutno okužbo urotelija oblikujejo znotrajcelične rezervoarje bakterij, ki predstavljajo latentno znotrajcelično zalogo bakterij za kasnejše izbruhe bolezni. Ta latentna oblika bakterij znotraj celic epitelija sečnega mehurja je zaščitene pred antibiotiki in jih je zelo težko odstraniti. Na mišjem modelu UTI smo s pomočjo hitozana, kot luščilca urotelijskih celic, prikazali seljenje bakterij med različnimi plastmi celic urotelija v času okužbe. Izkazalo se je, da se po vdoru bakterij v površinsko plast diferenciranih celic urotelija, te bakterije namnožijo in okužijo tudi nižje plasti manj diferenciranih urotelijskih celic. Med terminalno diferenciacijo okuženih urotelijskih celic se bakterije ponovno aktivirajo, namnožijo in lahko zapustijo celice ter vstopijo v lumen mehurja, od tam pa ponovno v druge urotelijske celice. Z uporabo hitozana smo pokazali, da luščenje površinske plasti urotelijskih celic, aktivira latentne znotrajcelične rezervoarje UPEC v diferencirajočih se celicah nižjih plasti urotelija. Ob hkratni uporabi hitozana in antibiotikov se je količina bakterij v mehurju značilno zmanjšala. Ta postopek ima lahko terapevtski pomen pri zdravljenju kroničnih ponavljajočih se vnetij sečnega mehurja.
COBISS.SI-ID: 31235545
Normalen urotelij zagotavlja prepreko prepustnosti med urinom in tkivnimi tekočinami ter hkrati omogoča ustrezno signalizacijo v sečnem mehurju. V študiji smo iskali korelacijo med diferenciacijsko stopnjo urotelijskih celic bolnikov s papilarnimi urotelijskimi tumorji in izražanjem ter razporeditvijo senzornih proteinov, in sicer purinergičnih receptorjev in vaniloidnih kanalčkov. Za purinergični receptor P2X3 in vaniloidni kanalček TRPV1 se je pokazalo, da njuno izražanje pada z naraščajočim gradusom karcinomov, kar korelira z znižanjem diferenciacijske stopnje urotelijskih celic.
COBISS.SI-ID: 31334105