Elektrokemoterapija v kombinaciji z gensko terapijo s peritumoralno aplikacijo IL-12 je bila uporabljena pri zdravljenju mastocitomov pri 18 lastniških psih. Ocenjevali smo lokalni nadzor tumorja, stopnjo recidive in varnost kombinirane terapije. En mesec po terapiji smo zabeležili dober protitumorski učinek z visokim deležem pacientov s popolnim odgovorom, kateri se je med opazovalnim časom še povišal na 72%. Stranskih učinkov nismo zaznali. Pri 78% pacientov smo po elektrogenski terapiji z IL-12 zaznali povišan serumski IFN in/ali IL-12. Pri zdravljenih tumorjih smo s histološkim barvanjem opazili cpremembe v tumorski vaskularizaciji ter minimalne infiltracije limfocitov T. Po enem tednu nismo odkrili prisotnosti plazmidne DNA v ali okoli tumorja, poleg tega tudi ni bilo horizontalnega genskega prenosa plazmidne DNA. Naša klinična študija je dokazala močno protitumorsko učinkovitost elektrokemoterapije v kombinaciji z elektrogensko, katera je tudi preprečila nastanek recidiv ali oddaljenih metastaz. Poleg tega pa se je taka terapija izkazala za varno in preprosto za zdravljenje mastocitomov pri psih.
COBISS.SI-ID: 2248059
Genska terapija (GET) s plazmidom, ki kodira interlevkin 12 (IL-12) se je izkazala za učinkovito terapijo pri zdravljenju tumorjev v kliničnih študijah humanih in veterinarskih pacientov. Klinične študije v veterini so do zdaj uporabljale plazmide, ki so kodirali humani ali mačji IL-12 ter gen za odpornost proti ampicilinu, kar pristojne agencije odsvetujejo. Namen trenutne študije je priprava plazmida, ki kodira pasji IL-12 in gen za odpornost proti kanamicinu. Validacijo novega plazmida smo opravili na celičnih linijah pasjega malignega melanoma, katere do sedaj še niso bile uporabljene v GET študijah, ter na celičnih linijah humanega malignega melanoma. Celične linije pasjega in humanega malignega melanoma so bile transfecirane s plazmidom, ki kodira zeleni flourescirajoči protein pri različnih električnih pulzih z namenom določitve uspešnost transfekcije in preživetja celic. Izražanje IL-12 po GET s plazmidom, ki kodira pasji IL-12, smo določili s pomočjo qRT-PCR na nivoju mRNA ter ELISpot na nivoju proteinov. Rezultati so pokazali, da ima novi plazmid, ki kodira pasji IL-12 podobno ali višjo zmožnost ekspresije kot plazmid, ki kodira humani IL-12. Tako predstavlja obetajoč terapevtski plazmid za nadaljne klinične študije z gensko terapijo IL-12 za zdravljenje spontanih tumorjev pri psih. Poleg tega tudi zadovoljuje kriterije pristojnih agencij (FDA in EMA).
COBISS.SI-ID: 1989499
Electrokemoterapija je metoda lokalnega zdravljenja solidnih tumorjev. Glavni učinek elektroterapije je permeabilizacija membran tumorskih celic, povzročena z električnimi pulzi, kar omogoča povečano prehajanje citostatikov kot sta bleomicin in cisplatin v notranjost celice. Elektrokemoterapija je standardno zdravljenje kožnih in podkožnih tumorjev tako v humani kot tudi v veterinarski onkologiji. Namen tega članka je vizualni prikaz protokola zdravljenja tumorjev pri psih z elektrokemoterapijo ter spremljanje pacientov.
COBISS.SI-ID: 2495867
Imunoterapija je trenutno eden izmed najbolj obetavnih pristopov za zdravljenje raka. Genski prenos plazmidov z zapisom za interlevkin 12 (IL-12) vodi v produkcijo IL-12, ki povzroči polarizacijo imunskih celic v smer protitumorskemega odziva. Pri tem igrajo pomembno vlogi makrofagi. Cilj študije je bil ovrednotiti genski elektroprenos plazmida z zapisom za interlevkin 12 brez gena za antibiotično rezistenco na agresivnem mišjem tumorskem modelu melanoma, B16f10. Elektroprenos IL-12 je povzročil popolno in dolgotrajno regresijo tumorjev. Terapija je povzročila povišane serumske koncentracije IL-12 in interferona γ (mIFNγ). Histološko barvanje tumorjev s hematoksilen eozinom (HE) je pokazalo obsežno infiltracijo imunskih celic, ki je trajala od 4. – 14. dneva. Tudi Imunohistokemično barvanje F4/80, MHCII in CD11c je bilo bolj pozitivno v terapevtski skupini. Infiltracija imunskih celic v tumor in visoka gostota F4/80, MHCII in CD11c pozitivnih celic nakazujejo na polarizacijo makrofagov in prisotnost antigen predstavitvenih celic, kar prispeva k protitumorski učinkovitosti terapije z IL-12.
COBISS.SI-ID: 2663547
Uvod: Cilj raziskave je bil preučitev tumorskega odziva po kombinaciji elektrokemoterpije in genskega elektroprenosa IL-12 na psih s spontanimi mastocitomi (MCT). Materiali in metode: Enajst psov z enajstmi MCT je bilo vključenih v klinično študijo. V biopsijah tumorjev, ki smo jih zbrali pred terapijo (T0), 4 tedne (T1) in 8 tednov (T2) kasneje, smo opazovali histološke spremembe. Z imunohistološkim barvanjem smo barvali celične infiltrate v rezinah tumorjev s CD3, CD20, Foxp3 (Treg), CD68 in MHC-razred II protitelesi. Poleg tega smo na rezinah tumorjev barvali tudi proliferacijo celic in anti-apoptozo s protitelesi proti Ki-67 in Bcl-2. Antiangiogenezo smo preučevali z barvanjem protiteles proti faktorju VIII in CD31, kjer smo ocenjevali količino mikrožilja. Rezultati: Histopatološka preiskava vzorca T0 je potrdila diagnozo mastocitoma ter prikazala, da celični infiltrat vsebuje večinoma T limfocite ter makrofage. V T1 in T2 vzorcu se je število neoplastičnih celic močno zmanjšalo (7/11 primerov), v nekaterih primerih je bilo zaznati manjše skupine neoplastičnih celic (3/11) in v enem primeru je bilo število neoplastičnih celic še vedno veliko. Proliferacija celic je bila statistično značilno nižja v vzorcih T1 in T2 in izražanje anti-apoptotičnega proteina v T1. Količina mikrožil je bila močno zmanjšana v vseh vzorcih po terapiji. Število T limfocitov je naraslo v T1, čeprav ne statistično značilno, medtem ko je bilo število Treg celic statistično značilno višje v T1 in makrofagov v T2 vzorcu. Zaključek: Kombinacija elektrokemoterapije in genskega elektroprenosa IL-12 učinkovito sproži celično imunski odziv proti neoplastičnih celicah predvsem s strani T limfocitov in makrofagov. Poleg tega povzroči fibrotično proliferacijo z zmanjšanjem količine mikrožil.
COBISS.SI-ID: 2744443