Genska terapija (GET) s plazmidom, ki kodira interlevkin 12 (IL-12) se je izkazala za učinkovito terapijo pri zdravljenju tumorjev v kliničnih študijah humanih in veterinarskih pacientov. Klinične študije v veterini so do zdaj uporabljale plazmide, ki so kodirali humani ali mačji IL-12 ter gen za odpornost proti ampicilinu, kar pristojne agencije odsvetujejo. Namen trenutne študije je priprava plazmida, ki kodira pasji IL-12 in gen za odpornost proti kanamicinu. Validacijo novega plazmida smo opravili na celičnih linijah pasjega malignega melanoma, katere do sedaj še niso bile uporabljene v GET študijah, ter na celičnih linijah humanega malignega melanoma. Celične linije pasjega in humanega malignega melanoma so bile transfecirane s plazmidom, ki kodira zeleni flourescirajoči protein pri različnih električnih pulzih z namenom določitve uspešnost transfekcije in preživetja celic. Izražanje IL-12 po GET s plazmidom, ki kodira pasji IL-12, smo določili s pomočjo qRT-PCR na nivoju mRNA ter ELISpot na nivoju proteinov. Rezultati so pokazali, da ima novi plazmid, ki kodira pasji IL-12 podobno ali višjo zmožnost ekspresije kot plazmid, ki kodira humani IL-12. Tako predstavlja obetajoč terapevtski plazmid za nadaljne klinične študije z gensko terapijo IL-12 za zdravljenje spontanih tumorjev pri psih. Poleg tega tudi zadovoljuje kriterije pristojnih agencij (FDA in EMA).
COBISS.SI-ID: 1989499
Da bi zagotovili varen, učinkovit in nadzorovan kožni vnos plazmidne DNA, je potrebno izboljšati tako dostavne sisteme kot sestavo plazmidne DNA. Varnost genskega vnosa v kožo lahko tako bistveno izboljšamo z uporabo ne-virusnih dostavnih metod, kot je genski elektroprenos, kot tudi z razvojem tkivno-specifičnih promotorjev. V okviru opisane raziskave smo ocenili plazmidno DNA z novim kolagenskim kožno-specifičnim promotorjem (COL), ki smo ga vnesli v kožne celice in kožno tkivo s pomočjo metode genskega elektroprenosa. Sprva smo in vitro določili specifičnost promotorja COL za transfekcijo fibroblastov. Specifično izražanje plazmidne DNA s promotorjem COL smo zaznali tako v primeru vnosa reporterskega gena DsRed kot terapevtskega gena, ki kodira IL-12. V nadaljevanju smo in vivo na mišjem modelu dosegli učinkovit vnos reporterskega gena DsRed v kožo. Kljub temu da je bilo izražanje DsRed zaznavno in enakomerno kontrolirano, se je plazmid s kolagenskim promotorjem izražal z nižjo intenziteto in krajši čas v primerjavi s konstitutivnim promotorjem. Koncentracija IL-12, izmerjenega v koži po vnosu terapevtskega plazmida s promotorjem COL, je bila primerljiva s kontrolno skupino (injiciranje destilirane vode in aplikacija električnih pulzov). Prednost pa je, da smo z vnosom terapevtskega gena pod kontrolo promotorja COL dosegli lokalno, specifično izražanje genskega produkta v koži, brez zaznavnih sistemskih koncentracij IL-12. Tako doseženo specifično ciljanje kožnih celic s tkivno-specifičnim promotorjem je pomemben korak k izboljšanju učinkovitosti in varnosti kožne genske terapije in DNA vakcin.
COBISS.SI-ID: 1993083
Genski elektroprenos postaja vedno bolj priznana metoda za gensko terapijo raka, ki že vstopa v klinično fazo raziskav. Še posebej je zanimiva za nekatere indikacije: vakcinacijo preko transfekcije kože in mišic in izkoriščanje prostorske natančnosti, ki jo omogoča metoda sama za ciljanje tumorjev. Dizajniranje primernih vektorjev ima velik pomen za gladek prehod metode v kliniko. V tem prispevku smo predstavili pripravo klinično uporabnih plazmidov brez antibiotične rezistence za imuno- in antiangiogeno terapijo raka.
COBISS.SI-ID: 2118267